น้ำมัน Saposhnikovia divaricata บริสุทธิ์สำหรับทำเทียนและสบู่ น้ำมันหอมระเหยสำหรับเครื่องกระจายกลิ่นแบบขายส่ง ใหม่สำหรับเครื่องกระจายกลิ่นแบบใช้เตาเผาไม้

คำอธิบายสั้น ๆ :

 

2.1. การจัดทำ SDE

เหง้า SD ซื้อในรูปแบบสมุนไพรแห้งจากบริษัท Hanherb (เมืองกูรี ประเทศเกาหลี) วัตถุดิบจากพืชได้รับการยืนยันทางอนุกรมวิธานโดย ดร. โก-ยา ชเว จากสถาบันการแพทย์แผนตะวันออกแห่งเกาหลี (KIOM) ตัวอย่างใบสำคัญ (หมายเลข 2014 SDE-6) ถูกเก็บรักษาไว้ในหอพรรณไม้สมุนไพรเกาหลีของ Standard Herbal Resources เหง้า SD แห้ง (320 กรัม) ถูกสกัดสองครั้งด้วยเอทานอล 70% (ด้วยกระบวนการรีฟลักซ์ 2 ชั่วโมง) จากนั้นนำสารสกัดไปทำให้เข้มข้นภายใต้ความดันต่ำ กรองยาต้ม ทำแห้งแบบไลโอฟิไลซ์ และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4°C ผลผลิตของสารสกัดแห้งจากวัตถุดิบตั้งต้นดิบคือ 48.13% (w/w)

 

2.2 การวิเคราะห์โครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงเชิงปริมาณ (HPLC)

การวิเคราะห์โครมาโทกราฟีดำเนินการโดยใช้ระบบ HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) และเครื่องตรวจจับโฟโตไดโอดแบบอาร์เรย์ สำหรับการวิเคราะห์ SDE ด้วย HPLC นั้น prim-Oมาตรฐาน -glucosylcimifugin ได้รับการสั่งซื้อจากสถาบันส่งเสริมอุตสาหกรรมยาแผนโบราณแห่งเกาหลี (คยองซาน เกาหลี) และเซก-โอ-กลูโคซิลฮาเมาดอล และ 4′-O-β-ดี-กลูโคซิล-5-O-เมทิลวิซัมมินอลถูกแยกได้ภายในห้องปฏิบัติการของเราและระบุโดยการวิเคราะห์สเปกตรัม โดยหลักแล้วใช้ NMR และ MS

ตัวอย่าง SDE (0.1 มก.) ถูกละลายในเอธานอล 70% (10 มล.) การแยกทางโครมาโตกราฟีดำเนินการด้วยคอลัมน์ XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 มม., 5μม. Waters Co., Milford, MA, USA) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยอะซีโตไนไตรล์ (A) และกรดอะซิติก 0.1% ในน้ำ (B) ที่อัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร/นาที ใช้โปรแกรมไล่ระดับหลายขั้นตอนดังนี้: 5% A (0 นาที), 5–20% A (0–10 นาที), 20% A (10–23 นาที) และ 20–65% A (23–40 นาที) สแกนความยาวคลื่นตรวจจับที่ 210–400 นาโนเมตร และบันทึกที่ 254 นาโนเมตร ปริมาตรที่ฉีดคือ 10.0μL. สารละลายมาตรฐานสำหรับการกำหนดโครโมนสามชนิดถูกเตรียมไว้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 7.781 มก./มล. (ไพรม์-O-กลูโคซิลซิมิฟูจิน) 31.125 มก./มล. (4′-O-β-ดี-กลูโคซิล-5-O-เมทิลวิซัมมินอล) และ 31.125 มก./มล. (เซก-โอ-กลูโคซิลฮาเมาดอล) ในเมทานอลและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C

2.3. การประเมินฤทธิ์ต้านการอักเสบในหลอดทดลอง

2.3.1. การเพาะเลี้ยงเซลล์และการบำบัดตัวอย่าง

เซลล์ RAW 264.7 ได้มาจาก American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) และเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ DMEM ที่มียาปฏิชีวนะ 1% และ FBS 5.5% เซลล์ถูกบ่มเพาะในบรรยากาศที่มีความชื้นสัมพัทธ์ 5% CO2 ที่อุณหภูมิ 37°C เพื่อกระตุ้นเซลล์ อาหารเลี้ยงเซลล์ถูกแทนที่ด้วยอาหารเลี้ยงเซลล์ DMEM ใหม่ และไลโปโพลีแซ็กคาไรด์ (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ที่อุณหภูมิ 1μg/mL ถูกเติมในกรณีที่มีหรือไม่มี SDE (200 หรือ 400μกรัม/มล.) เป็นเวลาเพิ่มอีก 24 ชั่วโมง

2.3.2. การหาปริมาณไนตริกออกไซด์ (NO), โพรสตาแกลนดิน E2 (PGE2), ปัจจัยเนื้องอกเนโครซิส-α(งือออ-α) และการผลิตอินเตอร์ลิวคิน-6 (IL-6)

เซลล์ได้รับการบำบัดด้วย SDE และกระตุ้นด้วย LPS เป็นเวลา 24 ชั่วโมง การผลิต NO ได้รับการวิเคราะห์โดยการวัดไนไตรต์โดยใช้รีเอเจนต์ Griess ตามการศึกษาก่อนหน้านี้ [12]. การหลั่งของไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ PGE2, TNF-αและ IL-6 ถูกกำหนดโดยใช้ชุด ELISA (ระบบ R&D) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ผลของ SDE ต่อการผลิต NO และไซโตไคน์ถูกกำหนดที่ความยาวคลื่น 540 นาโนเมตรหรือ 450 นาโนเมตรโดยใช้เครื่อง Wallac EnVision™เครื่องอ่านไมโครเพลท (PerkinElmer)

2.4 การประเมินฤทธิ์ต้านโรคข้อเข่าเสื่อมในร่างกาย

2.4.1. สัตว์

หนู Sprague-Dawley ตัวผู้ (อายุ 7 สัปดาห์) ซื้อมาจาก Samtako Inc. (Osan, เกาหลี) และเลี้ยงภายใต้สภาวะควบคุมด้วยวงจรแสง/ความมืด 12 ชั่วโมง°C และ% ความชื้น หนูได้รับอาหารและน้ำจากห้องปฏิบัติการตามอำเภอใจขั้นตอนการทดลองทั้งหมดดำเนินการตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ (NIH) และได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของมหาวิทยาลัยแทจอน (แทจอน สาธารณรัฐเกาหลี)

2.4.2. การเหนี่ยวนำให้เกิด OA ร่วมกับ MIA ในหนู

สัตว์ได้รับการสุ่มและกำหนดเข้ากลุ่มการรักษาก่อนเริ่มการศึกษา (ต่อกลุ่ม) สารละลาย MIA (3 มก./50μฉีดน้ำเกลือ 0.9% ลิตร) เข้าไปในช่องข้อเข่าขวาโดยตรงภายใต้การดมยาสลบที่เหนี่ยวนำด้วยส่วนผสมของเคตามีนและไซลาซีน หนูถูกแบ่งแบบสุ่มออกเป็นสี่กลุ่ม ได้แก่ (1) กลุ่มน้ำเกลือที่ไม่ได้รับการฉีด MIA (2) กลุ่ม MIA ที่ได้รับการฉีด MIA (3) กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย SDE (200 มก./กก.) ซึ่งได้รับการฉีด MIA และ (4) กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วยอินโดเมทาซิน (IM) (2 มก./กก.) ซึ่งได้รับการฉีด MIA หนูถูกให้ SDE และ IM ทางปาก 1 สัปดาห์ก่อนการฉีด MIA เป็นเวลา 4 สัปดาห์ ขนาดยา SDE และ IM ที่ใช้ในการศึกษานี้อ้างอิงจากที่ใช้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ [10-13-14].

2.4.3 การวัดการกระจายน้ำหนักของอุ้งเท้าหลัง

หลังจากการกระตุ้น OA ความสมดุลดั้งเดิมของความสามารถในการรับน้ำหนักของขาหลังถูกทำลายลง เครื่องทดสอบความคงทนต่อการรับน้ำหนัก (Linton instrumentation, Norfolk, สหราชอาณาจักร) ถูกใช้เพื่อประเมินการเปลี่ยนแปลงของความคลาดเคลื่อนในการรับน้ำหนัก หนูถูกวางอย่างระมัดระวังในห้องวัด แรงรับน้ำหนักที่ขาหลังออกแรงถูกเฉลี่ยในช่วงเวลา 3 วินาที อัตราส่วนการกระจายน้ำหนักคำนวณได้จากสมการต่อไปนี้: [น้ำหนักที่ขาหลังขวา/(น้ำหนักที่ขาหลังขวา + น้ำหนักที่ขาหลังซ้าย)] × 100 [15].

2.4.4 การวัดระดับไซโตไคน์ในซีรั่ม

ตัวอย่างเลือดถูกปั่นที่ 1,500 กรัม เป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิ 4°C จากนั้นเก็บซีรัมและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -70°C จนกว่าจะนำไปใช้ ระดับของ IL-1β, อิล-6, ทีเอ็นเอฟ-αและ PGE2 ในซีรั่มได้รับการวัดโดยใช้ชุด ELISA จาก R&D Systems (เมืองมินนิอาโปลิส รัฐมินนิโซตา สหรัฐอเมริกา) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

2.4.5. การวิเคราะห์ RT-PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์

สกัด RNA ทั้งหมดจากเนื้อเยื่อข้อเข่าโดยใช้ TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ถอดรหัสย้อนกลับเป็น cDNA และเพิ่มปริมาณด้วย PCR โดยใช้ชุด TM One Step RT PCR ที่มี SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) การวิเคราะห์ PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ดำเนินการโดยใช้ระบบ Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) ลำดับไพรเมอร์และลำดับโพรบแสดงไว้ในตาราง1. ส่วนของ cDNA ตัวอย่างและ cDNA ของ GAPDH ในปริมาณที่เท่ากันถูกเพิ่มปริมาณด้วยส่วนผสมหลัก TaqMan® Universal PCR ที่มี DNA polymerase ตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) สภาวะ PCR คือ 2 นาทีที่ 50°C, 10 นาทีที่ 94°C, 15 วินาทีที่ 95°C และ 1 นาทีที่ 60°C เป็นเวลา 40 รอบ ความเข้มข้นของยีนเป้าหมายถูกกำหนดโดยใช้วิธีเปรียบเทียบ Ct (จำนวนรอบขีดจำกัด ณ จุดตัดระหว่างกราฟการขยายและค่าขีดจำกัด) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ราคา FOB:0.5 - 9,999 ดอลลาร์สหรัฐ / ชิ้น

ปริมาณการสั่งซื้อขั้นต่ำ:100 ชิ้น/ชิ้น

ความสามารถในการจัดหา:10,000 ชิ้น/ชิ้นต่อเดือน