โรคข้อเข่าเสื่อม (OA) เป็นโรคข้อกระดูกเสื่อมเรื้อรังระยะยาวชนิดหนึ่งที่ส่งผลกระทบต่อประชากรวัย 65 ปีขึ้นไป [
1- โดยทั่วไป ผู้ป่วย OA จะได้รับการวินิจฉัยว่ามีกระดูกอ่อนเสียหาย ไขข้ออักเสบ และคอนโดรไซต์ที่ถูกกัดกร่อน ซึ่งกระตุ้นให้เกิดความเจ็บปวดและความทุกข์ทรมานทางร่างกาย [
2- อาการปวดข้ออักเสบส่วนใหญ่เกิดจากการเสื่อมสภาพของกระดูกอ่อนในข้อต่อจากการอักเสบ และเมื่อกระดูกอ่อนได้รับความเสียหายอย่างหนัก กระดูกก็จะเกิดการชนกันทำให้เกิดความเจ็บปวดและความยากลำบากทางกายที่ทนไม่ไหว
3- มีการบันทึกการมีส่วนร่วมของผู้ไกล่เกลี่ยการอักเสบที่มีอาการต่างๆ เช่น ปวด บวม และตึงของข้อต่อไว้เป็นอย่างดี ในผู้ป่วย OA จะพบไซโตไคน์อักเสบซึ่งทำให้เกิดการสึกกร่อนของกระดูกอ่อนและกระดูกใต้ผิวหนังที่พบในของเหลวในไขข้อ [
4- ข้อร้องเรียนหลักสองประการที่ผู้ป่วย OA โดยทั่วไปมีคือความเจ็บปวดและการอักเสบของไขข้อ ดังนั้นเป้าหมายหลักของการรักษา OA ในปัจจุบันคือการลดความเจ็บปวดและการอักเสบ -
5- แม้ว่าการรักษาด้วย OA ที่มีอยู่ รวมถึงยาที่ไม่ใช่สเตียรอยด์และสเตียรอยด์ ได้รับการพิสูจน์ประสิทธิภาพในการบรรเทาอาการปวดและการอักเสบ แต่การใช้ยาเหล่านี้ในระยะยาวมีผลกระทบต่อสุขภาพที่รุนแรง เช่น โรคหลอดเลือดหัวใจ ระบบทางเดินอาหาร และความผิดปกติของไต [
6- ดังนั้นจึงจำเป็นต้องพัฒนายาที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นและมีผลข้างเคียงน้อยลงในการรักษาโรคข้อเข่าเสื่อม
ผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพจากธรรมชาติกำลังได้รับความนิยมมากขึ้นเรื่อยๆ เนื่องจากมีความปลอดภัยและหาซื้อได้ง่าย [
7- ยาแผนโบราณของเกาหลีได้รับการพิสูจน์ประสิทธิภาพในการรักษาโรคอักเสบหลายชนิด รวมถึงโรคข้ออักเสบ [
8- ออคแลนด์เดีย ลัปปา ดีซี ขึ้นชื่อในด้านคุณสมบัติทางยา เช่น เพิ่มการไหลเวียนของชี่เพื่อบรรเทาอาการปวดและบรรเทาท้อง และถูกนำมาใช้เป็นยาแก้ปวดตามธรรมชาติมาแต่โบราณ [
9- รายงานก่อนหน้านี้แนะนำว่า A. lappa มีฤทธิ์ต้านการอักเสบ [
10,
11], ยาแก้ปวด [
12], ต้านมะเร็ง [
13] และป้องกันทางเดินอาหาร [
14] เอฟเฟ็กต์ ฤทธิ์ทางชีวภาพต่างๆ ของ A. lappa เกิดจากสารประกอบออกฤทธิ์ที่สำคัญ: costunolide, dehydrocostuslactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone และ costuslactone [
15- การศึกษาก่อนหน้านี้อ้างว่า costunolide แสดงคุณสมบัติต้านการอักเสบในไลโปโพลีแซ็กคาไรด์ (LPS) ซึ่งกระตุ้นให้เกิดแมคโครฟาจผ่านการควบคุมของ NF-kB และวิถีโปรตีนช็อกความร้อน [
16,
17- อย่างไรก็ตาม ไม่มีการศึกษาใดที่ตรวจสอบกิจกรรมที่เป็นไปได้ของ A. lappa สำหรับการรักษา OA การวิจัยครั้งนี้ได้ตรวจสอบผลการรักษาของ A. lappa ต่อ OA โดยใช้ MIA (โมโนโซเดียม-ไอโอโดอะซิเตต) และแบบจำลองหนูที่เกิดจากกรดอะซิติก
โมโนโซเดียม-ไอโอโดอะซิเตต (MIA) ถูกใช้อย่างมีชื่อเสียงในการสร้างพฤติกรรมความเจ็บปวดและลักษณะทางพยาธิสรีรวิทยาของ OA ในสัตว์ [
18,
19,
20- เมื่อฉีดเข้าไปในข้อเข่า MIA จะรบกวนการเผาผลาญของเซลล์คอนโดและทำให้เกิดการอักเสบและอาการอักเสบ เช่น กระดูกอ่อนและการพังทลายของกระดูกใต้ผิวหนัง ซึ่งเป็นอาการสำคัญของ OA [
18- การตอบสนองแบบบิดงอที่เกิดจากกรดอะซิติกได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวางว่าเป็นการจำลองความเจ็บปวดบริเวณรอบข้างในสัตว์ซึ่งสามารถวัดความเจ็บปวดจากการอักเสบในเชิงปริมาณได้ [
19- RAW264.7 เซลล์มาโครฟาจของเมาส์เป็นที่นิยมใช้ในการศึกษาการตอบสนองของเซลล์ต่อการอักเสบ เมื่อเปิดใช้งานด้วย LPS มาโครฟาจ RAW264 จะกระตุ้นวิถีการอักเสบและหลั่งตัวกลางการอักเสบหลายชนิด เช่น TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS และ IL-6
20- การศึกษานี้ได้ประเมินผลในการต้านความรู้สึกเจ็บปวดและต้านการอักเสบของ A. lappa ต่อ OA ในแบบจำลองสัตว์ MIA แบบจำลองสัตว์ที่เกิดจากกรดอะซิติก และเซลล์ RAW264.7 ที่กระตุ้นด้วย LPS
2. วัสดุและวิธีการ
2.1. วัสดุจากพืช
รากแห้งของ A. lappa DC. ที่ใช้ในการทดลองได้รับการจัดหาจาก Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (โซล, เกาหลี) ระบุโดย Prof. Donghun Lee แผนกเภสัชวิทยาสมุนไพร, Col. of Korean Medicine, Gachon University และหมายเลขตัวอย่างบัตรกำนัลถูกฝากไว้ที่ 18060301
2.2. การวิเคราะห์ HPLC ของสารสกัด A. lappa
A. lappa ถูกสกัดโดยใช้เครื่องมือไหลย้อน (น้ำกลั่น 3 ชั่วโมงที่ 100 °C) สารละลายที่ถูกสกัดถูกกรองและควบแน่นโดยใช้เครื่องระเหยความดันต่ำ สารสกัด A. lappa ให้ผลผลิต 44.69% หลังจากการทำแห้งแบบเยือกแข็งที่อุณหภูมิ -80 °C การวิเคราะห์โครมาโตกราฟีของ A. lappa ดำเนินการด้วย HPLC ที่เชื่อมต่อโดยใช้ระบบ 1260 InfinityⅡ HPLC (Agilent, Pal Alto, CA, USA) สำหรับการแยกสี คอลัมน์ EclipseXDB C18 (4.6 × 250 มม., 5 µm, Agilent) ถูกใช้ที่ 35 °C ตัวอย่างทั้งหมด 100 มก. ถูกเจือจางในเมธานอล 50% 10 มล. และโซนิคเป็นเวลา 10 นาที ตัวอย่างถูกกรองด้วยตัวกรองเข็มฉีดยา (Waters Corp., Milford, MA, USA) ที่ 0.45 μm องค์ประกอบเฟสเคลื่อนที่คือกรดฟอสฟอริก (A) 0.1% และอะซิโตไนไตรล์ (B) และคอลัมน์ถูกชะออกดังนี้: 0–60 นาที, 0%; 60–65 นาที 100%; 65–67 นาที 100%; 67–72 นาที, ตัวทำละลาย B 0% ด้วยอัตราการไหล 1.0 มล./นาที น้ำทิ้งถูกสังเกตที่ 210 นาโนเมตรโดยใช้ปริมาตรการฉีดที่ 10 ไมโครลิตร การวิเคราะห์ดำเนินการเป็นสามเท่า
2.3. ที่อยู่อาศัยและการจัดการสัตว์
ซื้อหนู Sprague – Dawley (SD) ตัวผู้อายุ 5 สัปดาห์และหนู ICR ตัวผู้อายุ 6 สัปดาห์จาก Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea) สัตว์ถูกเลี้ยงในห้องโดยใช้อุณหภูมิคงที่ (22 ± 2 °C) และความชื้น (55 ± 10%) และวงจรแสง/มืดที่ 12/12 ชั่วโมง สัตว์คุ้นเคยกับสภาวะนี้นานกว่าหนึ่งสัปดาห์ก่อนเริ่มการทดลอง สัตว์ได้รับอาหารและน้ำอย่างไม่จำกัด กฎทางจริยธรรมปัจจุบันสำหรับการดูแลและการจัดการสัตว์ของมหาวิทยาลัย Gachon (GIACUC-R2019003) ได้รับการปฏิบัติตามอย่างเคร่งครัดในทุกขั้นตอนการทดลองกับสัตว์ การศึกษานี้ได้รับการออกแบบโดยผู้ตรวจสอบปกปิดและการทดลองแบบคู่ขนาน เราปฏิบัติตามวิธีการการการุณยฆาตตามแนวทางของคณะกรรมการจริยธรรมการทดลองสัตว์
2.4. MIA การฉีดและการรักษา
หนูถูกสุ่มแยกออกเป็น 4 กลุ่ม ได้แก่ เสแสร้ง กลุ่มควบคุม อินโดเมธาซิน และก. ลัปป้า เมื่อดมยาสลบด้วยส่วนผสม isofluorane O2 2% หนูถูกฉีดโดยใช้ MIA 50 μL (40 มก. / ม. ; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) เข้าไปในข้อเข่าเพื่อนำไปสู่การทดลอง OA การรักษาได้ดำเนินการดังต่อไปนี้: กลุ่มควบคุมและกลุ่มหลอกลวงได้รับการดูแลด้วยอาหารพื้นฐาน AIN-93G เท่านั้น เฉพาะกลุ่มอินโดเมธาซินได้รับอินโดเมธาซิน (3 มก./กก.) ที่รวมอยู่ในอาหาร AIN-93G และกลุ่ม A. lappa 300 มก./กก. ได้รับมอบหมายให้กับอาหาร AIN-93G ที่เสริมด้วย A. lappa (300 มก./กก.) การรักษาดำเนินต่อไปเป็นเวลา 24 วันนับตั้งแต่วันที่มีการชักนำให้เกิด OA ในอัตรา 15–17 กรัมต่อน้ำหนักตัว 190–210 กรัมในแต่ละวัน
2.5. การวัดแบริ่งน้ำหนัก
หลังจากการเหนี่ยวนำ OA การวัดความสามารถในการรับน้ำหนักของแขนขาหลังของหนูได้ดำเนินการด้วยความไร้ความสามารถ - MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) ตามกำหนดเวลา คำนวณการกระจายน้ำหนักของแขนขาหลัง: ความสามารถในการรับน้ำหนัก (%)