โรคข้อเข่าเสื่อม (OA) เป็นโรคข้อเสื่อมเรื้อรังระยะยาวชนิดหนึ่งที่ส่งผลต่อผู้สูงอายุที่มีอายุมากกว่า 65 ปี [
1] โดยทั่วไปผู้ป่วยโรคข้อเสื่อมจะได้รับการวินิจฉัยว่ามีกระดูกอ่อนเสียหาย เยื่อหุ้มข้ออักเสบ และเซลล์กระดูกอ่อนสึกกร่อน ซึ่งกระตุ้นให้เกิดความเจ็บปวดและความเครียดทางร่างกาย [
2] อาการปวดข้ออักเสบส่วนใหญ่เกิดจากการเสื่อมของกระดูกอ่อนในข้อต่อจากการอักเสบ และเมื่อกระดูกอ่อนได้รับความเสียหายอย่างรุนแรง กระดูกอาจกระทบกัน ทำให้เกิดอาการปวดอย่างรุนแรงและความยากลำบากทางร่างกาย [
3]. มีการบันทึกข้อมูลเกี่ยวกับตัวกลางการอักเสบที่ทำให้เกิดอาการต่างๆ เช่น ปวด บวม และข้อแข็ง ในผู้ป่วยโรคข้อเสื่อม ไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบ ซึ่งทำให้เกิดการสึกกร่อนของกระดูกอ่อนและกระดูกใต้กระดูกอ่อน พบในน้ำไขข้อ [
4] อาการหลักสองประการที่ผู้ป่วยโรคข้อเสื่อมมักพบคืออาการปวดและการอักเสบของเยื่อหุ้มข้อ ดังนั้น เป้าหมายหลักของการบำบัดโรคข้อเสื่อมในปัจจุบันคือการลดอาการปวดและการอักเสบ [
5] แม้ว่าการรักษา OA ที่มีอยู่ รวมถึงยาที่ไม่ใช่สเตียรอยด์และยาสเตียรอยด์ ได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประสิทธิภาพในการบรรเทาอาการปวดและการอักเสบ แต่การใช้ยาเหล่านี้ในระยะยาวอาจส่งผลเสียต่อสุขภาพอย่างรุนแรง เช่น ความผิดปกติของระบบหัวใจและหลอดเลือด ระบบทางเดินอาหาร และไต [
6] ดังนั้น จำเป็นต้องมีการพัฒนายาที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นและมีผลข้างเคียงน้อยลงสำหรับการรักษาโรคข้อเข่าเสื่อม
ผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพจากธรรมชาติกำลังได้รับความนิยมเพิ่มมากขึ้น เนื่องจากมีความปลอดภัยและหาซื้อได้ง่าย [
7] ยาแผนโบราณของเกาหลีได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประสิทธิภาพในการต่อต้านโรคอักเสบหลายชนิด รวมถึงโรคข้ออักเสบ [
8]. Aucklandia lappa DC. เป็นที่รู้จักในคุณสมบัติทางยา เช่น ช่วยเพิ่มการไหลเวียนของพลังชี่เพื่อบรรเทาอาการปวดและบรรเทาอาการท้อง และถูกนำมาใช้เป็นยาแก้ปวดตามธรรมชาติมาโดยตลอด [
9]. รายงานก่อนหน้านี้ชี้ให้เห็นว่า A. lappa มีฤทธิ์ต้านการอักเสบ [
10,
11], ยาแก้ปวด [
12], ต้านมะเร็ง [
13] และป้องกันกระเพาะอาหาร [
14] ผลกระทบ ฤทธิ์ทางชีวภาพต่างๆ ของ A. lappa เกิดจากสารประกอบสำคัญที่ออกฤทธิ์ ได้แก่ costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone และ costuslactone [
15] การศึกษาในระยะแรกอ้างว่า costunolide แสดงคุณสมบัติต้านการอักเสบในลิโปโพลีแซ็กคาไรด์ (LPS) ซึ่งกระตุ้นให้เกิดแมคโครฟาจผ่านการควบคุมเส้นทางของ NF-kB และโปรตีนจากความร้อน [
16,
17] อย่างไรก็ตาม ยังไม่มีการศึกษาใดที่ศึกษาศักยภาพของ A. lappa ในการรักษาโรคข้อเสื่อม งานวิจัยนี้ได้ศึกษาผลการรักษาของ A. lappa ต่อโรคข้อเสื่อมโดยใช้ MIA (โมโนโซเดียมไอโอโดอะซิเตท) และแบบจำลองหนูทดลองที่เหนี่ยวนำด้วยกรดอะซิติก
โมโนโซเดียมไอโอโดอะซิเตท (MIA) มีชื่อเสียงในการใช้เพื่อก่อให้เกิดอาการเจ็บปวดและลักษณะทางพยาธิสรีรวิทยาของโรคข้อเสื่อมในสัตว์ [
18,
19,
20] เมื่อฉีดเข้าข้อเข่า MIA จะทำให้การเผาผลาญของเซลล์กระดูกอ่อนผิดปกติและทำให้เกิดการอักเสบและอาการอักเสบ เช่น กระดูกอ่อนและกระดูกใต้กระดูกอ่อนสึกกร่อน ซึ่งเป็นอาการหลักของโรคข้อเข่าเสื่อม [
18] การตอบสนองของการบิดตัวที่เกิดจากกรดอะซิติกนั้นถือกันอย่างกว้างขวางว่าเป็นการจำลองความเจ็บปวดบริเวณรอบนอกในสัตว์ ซึ่งสามารถวัดความเจ็บปวดจากการอักเสบได้ในเชิงปริมาณ [
19] เซลล์แมคโครฟาจของหนู RAW264.7 เป็นที่นิยมใช้ในการศึกษาการตอบสนองของเซลล์ต่อการอักเสบ เมื่อกระตุ้นด้วย LPS แมคโครฟาจ RAW264 จะกระตุ้นเส้นทางการอักเสบและหลั่งสารตัวกลางการอักเสบหลายชนิด เช่น TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS และ IL-6 [
20] การศึกษาครั้งนี้ได้ประเมินผลการต้านความเจ็บปวดและต้านการอักเสบของ A. lappa ต่อ OA ในสัตว์ทดลองที่เป็นโรค MIA สัตว์ทดลองที่เหนี่ยวนำโดยกรดอะซิติก และเซลล์ RAW264.7 ที่กระตุ้นด้วย LPS
2. วัสดุและวิธีการ
2.1. วัสดุจากพืช
รากแห้งของ A. lappa DC. ที่ใช้ในการทดลองนี้จัดหามาจากบริษัท Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (โซล เกาหลีใต้) ศาสตราจารย์ Donghun Lee ภาควิชาเภสัชวิทยาสมุนไพร คณะแพทยศาสตร์เกาหลี มหาวิทยาลัย Gachon ได้ตรวจสอบและรับรองตัวอย่างใบสำคัญเลขที่ 18060301
2.2. การวิเคราะห์ HPLC ของสารสกัด A. lappa
สกัด A. lappa โดยใช้เครื่องรีฟลักซ์ (น้ำกลั่น 3 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียส) สารละลายที่สกัดได้จะถูกกรองและควบแน่นโดยใช้เครื่องระเหยความดันต่ำ สารสกัด A. lappa ให้ผลผลิต 44.69% หลังจากการทำแห้งแบบเยือกแข็งที่อุณหภูมิ -80 องศาเซลเซียส การวิเคราะห์เชิงโครมาโตกราฟีของ A. lappa ดำเนินการโดยใช้เครื่อง HPLC ที่เชื่อมต่อด้วยระบบ 1260 InfinityⅡ HPLC (Agilent, Pal Alto, CA, USA) สำหรับการแยกสารแบบโครมาติก ใช้คอลัมน์ EclipseXDB C18 (4.6 × 250 มม., 5 ไมโครเมตร, Agilent) ที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียส เจือจางตัวอย่างทั้งหมด 100 มิลลิกรัมในเมทานอล 50% ปริมาตร 10 มิลลิลิตร แล้วนำไปผ่านเครื่องโซนิเคตเป็นเวลา 10 นาที ตัวอย่างถูกกรองด้วยตัวกรองแบบไซริงก์ (Waters Corp., Milford, MA, USA) ขนาด 0.45 ไมโครเมตร ส่วนประกอบเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยกรดฟอสฟอริก (A) 0.1% และอะซีโตไนไตรล์ (B) จากนั้นคอลัมน์ถูกชะออกดังนี้: 0–60 นาที, 0%; 60–65 นาที, 100%; 65–67 นาที, 100%; 67–72 นาที, 0% ตัวทำละลาย B ด้วยอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร/นาที ตรวจพบน้ำทิ้งที่ความยาวคลื่น 210 นาโนเมตร โดยใช้ปริมาตรที่ฉีด 10 ไมโครลิตร การวิเคราะห์ดำเนินการซ้ำสามครั้ง
2.3. การจัดการและที่อยู่อาศัยของสัตว์
หนูสปราก-ดอว์ลีย์ (SD) เพศผู้ อายุ 5 สัปดาห์ และหนู ICR เพศผู้ อายุ 6 สัปดาห์ ซื้อจากบริษัท Samtako Bio Korea (จังหวัดคยองกีโด ประเทศเกาหลี) เลี้ยงสัตว์ในห้องที่มีอุณหภูมิคงที่ (22 ± 2 °C) และความชื้น (55 ± 10%) และมีวงจรแสง/ความมืด 12/12 ชั่วโมง สัตว์เหล่านี้คุ้นเคยกับสภาวะดังกล่าวนานกว่าหนึ่งสัปดาห์ก่อนเริ่มการทดลอง สัตว์ได้รับอาหารและน้ำอย่างเพียงพอ กฎจริยธรรมปัจจุบันสำหรับการดูแลและการจัดการสัตว์ของมหาวิทยาลัยกาชน (GIACUC-R2019003) ได้รับการปฏิบัติตามอย่างเคร่งครัดในทุกขั้นตอนการทดลองกับสัตว์ การศึกษานี้ได้รับการออกแบบโดยนักวิจัยที่ปกปิดข้อมูลและการทดลองแบบคู่ขนาน เราใช้วิธีการุณยฆาตตามแนวทางของคณะกรรมการจริยธรรมการทดลองสัตว์
2.4 การฉีดและการรักษา MIA
หนูถูกสุ่มแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม ได้แก่ กลุ่มทดลอง กลุ่มควบคุม กลุ่มอินโดเมทาซิน และกลุ่ม A. lappa หนูถูกวางยาสลบด้วยสารผสมไอโซฟลูเรน O2 ความเข้มข้น 2% แล้วฉีด MIA (40 มก./ม.; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) เข้าข้อเข่าโดยเฉพาะ เพื่อนำไปสู่ภาวะข้อเข่าเสื่อมในการทดลอง การรักษาดำเนินการดังนี้: กลุ่มควบคุมและกลุ่มทดลองได้รับอาหารพื้นฐาน AIN-93G เท่านั้น กลุ่มอินโดเมทาซินได้รับอินโดเมทาซิน (3 มก./กก.) ร่วมกับอาหาร AIN-93G เท่านั้น และกลุ่ม A. lappa 300 มก./กก. ได้รับอาหาร AIN-93G เสริมด้วยอาหาร A. lappa (300 มก./กก.) การรักษาจะดำเนินต่อไปเป็นเวลา 24 วันนับตั้งแต่วันเหนี่ยวนำ OA ในอัตรา 15–17 กรัมต่อน้ำหนักตัว 190–210 กรัมในแต่ละวัน
2.5. การวัดการรับน้ำหนัก
หลังจากการกระตุ้น OA การวัดความสามารถในการรับน้ำหนักของขาหลังของหนูถูกดำเนินการด้วยเครื่องวัดความสามารถในการรับน้ำหนัก MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) ตามกำหนด คำนวณการกระจายน้ำหนักบนขาหลัง: ความสามารถในการรับน้ำหนัก (%)
